在本研究中，作者將VEGF封裝的活化中性粒細胞外泌體模擬物（aPMNEM）裝入ECM，以開發(fā)用于治療慢性傷口的VEGF-aPMNEM-ECM。首先對納米材料進行合成，而后驗證aPMNEM的質量，作者使用了TEM，Western blotting, NTA和Zeta電位測量進行了表征。TEM和NTA結果顯示，aPMNEM的直徑約為160nm，與PMNExo、aPMNExo和PMNEM的大小相似。Zeta電位測量顯示，aPMNEM的電位約為-40 mV，與PMNExo、aPMNExo和PMNEM的表面膜電位相似。為了量化aPMNEM的產(chǎn)量，作者測量了由相同數(shù)量的細胞通過NTA產(chǎn)生的PMNExo、aPMNExo、PMNEM和aPMNEM的數(shù)量。NTA顯示，通過多層過濾擠出生產(chǎn)的aPMNEM產(chǎn)量約為aPMNExo產(chǎn)量的10倍。接下來，為了研究aPMNEM的質量，作者進行了4D無標記定量蛋白質組學分析，并通過主成分分析（PCA）、火山圖分析和熱圖分析比較了aPMNEM和PMNExo的蛋白質含量。PCA顯示aPMNEM和PMNExo蛋白含量不同。此外，蛋白質組學分析發(fā)現(xiàn)，與PMNExo相比，aPMNEM中有1807種不同的蛋白質類型具有顯著差異。與PMNExo相比，aPMNEM中差異表達的蛋白中有1501個蛋白上調(diào)（折疊變化>2），306個蛋白下調(diào)（折疊變化>2）。GO注釋分析顯示aPMNEM與PMNExo具有相似的生物過程、細胞成分和分子功能。在殺菌相關蛋白中，中性粒細胞明膠酶相關脂鈣蛋白（LCN2）、溶菌酶（LYZ）和肽聚糖識別蛋白（PGLYRP1）上調(diào)，而補體C3（C3）、髓過氧化物酶（MPO）和補體C4-B（C4B）在PMNEM中與PMNExo相比下調(diào)。最后作者通過物理冷凍結合SDS-Triton洗脫法制備了溫度敏感的ECM水凝膠。

為了驗證VEGF-aPMNM-ECM的生物相容性，作者通過H&E染色法觀察這些器官的生理結構變化。結果顯示，與PBS處理的對照組相比，VEGF-aPMNM-ECM對SD大鼠全層皮膚創(chuàng)面模型無明顯的病理改變，說明VEGF-aPMNM-ECM對SD大鼠全層皮膚創(chuàng)面模型無毒性作用。同時使用了小動物體內(nèi)成像驗證VEGF - aPMNEM在創(chuàng)面的生物分布，顯示出aPMNEM在傷口部位保持48小時的功能，并且不隨時間擴散。

VEG為了確定ECM的組成，作者通過進行4D無標記定量蛋白質組學分析來分析ECM的蛋白質含量。在ECM水凝膠中共發(fā)現(xiàn)112種蛋白質。生物信息學研究揭示了ECM與“細胞外成分"之間的相關性。根據(jù)以往的研究，那些數(shù)量較多的蛋白，如膠原I，可使M1巨噬細胞轉化為M2巨噬細胞。CD86 (M1巨噬細胞表面標記物)和CD206 (M2巨噬細胞表面標記物)抗體IF分析結果證實，ECM、aPMNEM - ECM和VEGF-aPMNEM-ECM治療組顯著誘導M1巨噬細胞向M2巨噬細胞轉化；但三組間無明顯差異。