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C57小鼠皮膚成纖維細(xì)胞原代培養(yǎng)的方法

實驗方法1.將實驗小鼠脫頸處死，75%乙醇浸泡5min，固定，備皮，取背部皮膚至于含雙抗的冷PBS緩沖液中。2.仔細(xì)剝離脂肪，血管等多余組織，PBS清洗，加胰酶消化1h。3.分離真表皮，去除表皮后，PBS清洗3次。4.將真皮部分于培養(yǎng)皿內(nèi)剪碎，加入適量胰酶，轉(zhuǎn)移至15ml離心管內(nèi)，37℃恒溫水浴消化1h。5.消化結(jié)束后，加入H-DMEM*培養(yǎng)基終止反應(yīng)，1000rpm離心5min，棄上清。6.PBS清洗一遍，離心棄上清。7.將清洗后的組織塊均勻鋪于6cm培養(yǎng)皿內(nèi)，加入2ml*...

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說說關(guān)于細(xì)胞外泌體研究的幾個重要問題

外泌體是細(xì)胞分泌到胞外的一種囊泡，其大小為30-150nm，具有雙層膜結(jié)構(gòu)和茶托狀形態(tài)，含有豐富的內(nèi)含物（包括核酸、蛋白和脂質(zhì)等），參與細(xì)胞間的分子傳遞。外泌體廣泛存在于細(xì)胞培養(yǎng)上清以及各種體液中，細(xì)胞外泌體研究是近些年研究的熱點。細(xì)胞外泌體主要原理是根據(jù)外泌體的密度、粒徑、沉降系數(shù)和親和力等差異進行分離，提取方法包括傳統(tǒng)的差速離心、密度梯度離心，以及后來發(fā)展的超濾法、聚合物沉淀法、免疫分離、隔離篩選法、體積排阻色譜法等。這些方法各有利弊。細(xì)胞外泌體研究常見問題：1、培養(yǎng)細(xì)胞...

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SD大鼠乳鼠心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞原代分離培養(yǎng)方法

1.將新生24h的SD大鼠用75%乙醇浸泡5min，開胸，取出心臟后于含有雙抗的預(yù)冷過的D-HANKS中漂洗兩遍，移入超凈臺。2.仔細(xì)剪除大血管，左右心房及右心室和室間隔，保留左心室，去除內(nèi)、外膜，PBS清洗。3.用眼科剪將心室肌剪碎至約1mm3，滴加1ml胎牛血清，均勻接種于6cm細(xì)胞培養(yǎng)皿內(nèi)，組織塊間隔1-2mm，放入5%CO2，37℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。4.4小時后去除培養(yǎng)皿，加入3ml含有20%FBS和1%雙抗的H-DMEM培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)。5.一般情況下48小時后可見...

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新生SD大鼠大腦皮層神經(jīng)元原代分離培養(yǎng)方法

一.實驗方法1.多聚賴氨酸（Poly-D-Lysine）包被培養(yǎng)板的制備：原代分離進行前一天，用PBS緩沖液配制終濃度為0.1mg/ml的多聚賴氨酸工作液，0.22μm濾膜過濾除菌，于超凈工作臺內(nèi)吸取1ml加入六孔板內(nèi)，確保覆蓋板底，靜置孵育30min后吸出（可回收反復(fù)使用2-3次），用無菌水清洗培養(yǎng)板，置于超凈臺內(nèi)晾干，照紫外過夜。2.次日，取出生24h以內(nèi)的SD大鼠，75%乙醇浸泡消毒5min。3.棉球吸干乳鼠體表的乙醇，迅速斷頭，浸泡于冰冷的含有2%雙抗的PBS緩沖液中...

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原代細(xì)胞分離培養(yǎng)都有哪幾種方法？

研究中常用的細(xì)胞系/株系是現(xiàn)成的，我們只需要進行細(xì)胞傳代和種子保存。然而，這些細(xì)胞系往往因長期體外培養(yǎng)而失去原有的生物學(xué)特性，對藥物治療的反應(yīng)差距越來越大。因此，越來越多的人選擇原代細(xì)胞。來源于胚胎、組織、器官和外周血，經(jīng)特殊分離方法制備的原代培養(yǎng)細(xì)胞稱為原代細(xì)胞。原代細(xì)胞培養(yǎng)，也稱為原代培養(yǎng)，是從供體獲得的組織細(xì)胞在體外的培養(yǎng)。原代細(xì)胞是接近和最能反映體內(nèi)生長特性的細(xì)胞，適用于藥敏試驗、細(xì)胞分化等實驗研究。原代細(xì)胞分離培養(yǎng)都有哪幾種方法？1、組織培養(yǎng)法組織培養(yǎng)是一種常見、簡...

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充質(zhì)干細(xì)胞涉及的研究竟然這么多

充質(zhì)干細(xì)胞是人體內(nèi)一類具有自我更新和多向分化潛能的原始細(xì)胞群。根據(jù)遺傳來源的分類，干細(xì)胞可分為胚胎干細(xì)胞和成體干細(xì)胞。其中，胚胎干細(xì)胞具有發(fā)育全能性，是干細(xì)胞研究和應(yīng)用中具吸引力的一種。然而，關(guān)于胚胎干細(xì)胞的研究一直存在倫理爭議。與胚胎干細(xì)胞相比，成體干細(xì)胞具有獲取方便、致瘤風(fēng)險低、無倫理爭議等優(yōu)點。因此，成體干細(xì)胞已成為干細(xì)胞臨床應(yīng)用研究的主要對象。在成體干細(xì)胞的許多臨床研究中，充質(zhì)干細(xì)胞是最多的。間充質(zhì)干細(xì)胞是一種來源于中胚層的成體干細(xì)胞，具有自我更新和多向分化的潛能。間...

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原代細(xì)胞分離培養(yǎng)有哪些注意事項？

原代細(xì)胞分離培養(yǎng)有哪些注意事項？1、組織塊培養(yǎng)法（1）接種后的前3天，觀察和移動時注意不要引起液體振蕩。避免頻繁的翻倒和振動，否則組織塊不易附著在瓶壁上或附著后脫落飄浮。（2）加入的培養(yǎng)基不宜過多，以免浸泡的組織因輕微波動而脫落。（3）細(xì)胞向外遷移時，注意記錄并清除漂浮的組織塊和殘留細(xì)胞。它們產(chǎn)生的有毒物質(zhì)會影響原代細(xì)胞的生長。（4）為促進組織塊盡快貼在培養(yǎng)瓶上，可在種植前在培養(yǎng)瓶底壁涂上一層薄薄的膠原蛋白。2、貼壁原代細(xì)胞（1）原代細(xì)胞分離培養(yǎng)的分離細(xì)胞一次接觸體外環(huán)境時，...

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充質(zhì)干細(xì)胞的醫(yī)療價值真的很高

充質(zhì)干細(xì)胞是一種早期未分化細(xì)胞，具有自我更新、自我復(fù)制、無限增殖和多向分化潛能等特點。它們可以分泌細(xì)胞因子，減輕炎癥，減少組織細(xì)胞凋亡，促進內(nèi)源性組織器官干祖細(xì)胞的增殖，進行免疫調(diào)節(jié)，從而達到作為種子細(xì)胞修復(fù)組織器官的效果。經(jīng)過連續(xù)傳代和冷凍保存后，仍具有多向分化潛能，被醫(yī)學(xué)界稱為“萬能細(xì)胞”。隨著研究的深入，發(fā)現(xiàn)充質(zhì)干細(xì)胞實際上是一組具有高自我更新能力和不同分裂增殖能力的多能干細(xì)胞。它們可以在體外培養(yǎng)和擴增，也可以在特定條件下分化成神經(jīng)細(xì)胞、成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、肌肉細(xì)胞、脂...

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